Чувствительность бактерий к антибиотикам

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам;

Биологический (экспериментальный) метод исследования

Биологический метод исследования — совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных. Этот метод преследует также ряд других целей:

1. Диагностика инфекционных болезней.

2. Выделение и идентификация чистой культуры.

3. Определение вирулентности.

4. Выделение и идентификация экзотоксинов.

5. Культивирование вирусов.

6. Получение иммунопрепаратов.

7. Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов (в т.ч. химиопрепаратов, иммунопрепаратов) и другие.

1. Забор материала (виды материала см. Бактериоскопический метод),

2. Обработка материала.

3. Выбор лабораторного животного, исходя из его чувствительности к предполагаемому возбудителю, его стандартизация и маркировка.

4. Заражение животных одним из способов (подкожный, внутрикожный, внутрибрюшинный, внутримышечный, интрацеребральный, внутривенный, в желудок, интраназальный и др.) в зависимости от тропизма микроба.

5. Регистрация признаков болезни зараженного животного или его смерти.

6. Прижизненный забор материала от животного и проведение бактериологического и серологического исследования, постановка аллергической пробы.

7. Вскрытие, изучение патологоанатомической и патоморфологической картины, протокольный посев органов павших или убитых животных (для выявления обсемененности и выделения чистой культуры). Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов.

8. Идентификация выделенной культуры.

9. Заключение по результатам исследования.

Метод высокочувствителен, может быть использован на ранних этапах

болезни, но не всегда доступен, дорог, длителен, небезопасен.

Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам применяют три метода: диффузии препарата в агар из бумажных дисков, серийных разведении в бульоне и в плотной питательной среде. Имеются также ускоренные методы.

8 качестве критерия чувствительности микробов к антибиотикам избирают их терапевтические концентрации в крови и других биотопах животного организма после введения определенных доз препарата. Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата(мкг/ед/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта (минимальная подавляющая концентрация — МПК).

Метод бумажных дисков. Для его проведения нужны стандартные заводские диски, пропитанные антибиотиками в определенной концентрации, и стандартная питательная среда. Из суточной микробной культуры готовят взвесь на физрастворе (густота 1 млрд микробных тел в 1 мл), которую затем разводят в 10 раз. На поверхность плотной среды наливают 1 -2 мл указанной культуры и покачиванием чашки равномерно распределяют ее по всей поверхности среды. Остаток удаляют пипеткой. Среду подсушивают 10-15 мин при комнатной температуре, после чего на поверхность газона стерильным пинцетом накладывают диски (не более 6 на чашку) на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки. Инкубируют в термостате при 37°С — 24 часа.

Учет: в падающем свете на фоне темной поверхности измеряют диаметр (с учетом диаметра диска) задержки роста. Оценку результатов проводят по специальной таблице путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице. Культуру относят к одной из трех категорий:

чувствительная, умеренно-чувствительная и устойчивая. Указанные категории предложены клинической химиотерапией, исходя из отношения между МПК и концентрацией препарата в крови при введении терапевтических доз. К чувствительным относят культуры, рост которых подавляется концентрациями препарата, создаваемыми в сыворотке крови больного в процессе назначения обычных доз антибиотика. Умеренно-устойчивыми считаются культуры, подавляемые концентрациями, которые могут быть достигнуты при введении максимальных доз препарата. Устойчивые — культуры, рост которых не подавляется при введении даже максимально допустимых доз препарата.

Указанный метод является полуколичественным. Для получения количественных результатов используют методы серийных разведении.

Метод серийного разведения антибиотика в бульоне. Готовят ряд убывающих разведении антибиотика в пробирках с бульоном (кратные 2) и добавляют испытуемую культуру. Контролем служит пробирка с бульоном и культурой без антибиотика. Через сутки инкубации в термостате определяют МПК, которая соответствует концентрации препарата в последней пробирке с видимой задержкой роста. Для определения бактерицидного действия из нескольких пробирок с задержкой роста делают высев петлей на сектора чашки Петри с МПА. За бактерицидную концентрацию принимают концентрацию препарата в последней пробирке, высев из которой не дал роста.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Нужно ли пить антибиотики гриппе

Метод серийных разведении в плотной питательной среде. Этот метод более чувствителен и точен. Каждый антибиотик испытывают в трех концентрациях (исходя из уровней чувствительности микроорганизмов), которые добавляют к расплавленному и охлажденному агару. Агар с антибиотиками разливают в три чашки Петри (по одной чашке на каждую концентрацию). Контролем служит чашка с агаром без антибиотика. Посев производят петлей или лучше штампом-репликатором, который позволяет одновременно определить чувствительность к трем концентрациям антибиотика 25-50 культур (в зависимости от числа лунок в штампе). Учет роста о термостате осуществляют спустя сутки. Культура считается чувствительной, если на месте посева нет ни одной колонии. Микроорганизмы, рост которых подавлен всеми 3 концентрациями, рассматривают как чувствительные (в этом случае можно применять антибиотик в терапевтической дозе); 2-й и 3-й концентрациями как среднечувствительные (антибиотик можно применять только в увеличенной дозе); 3-й как умеренно-устойчивые микроорганизмы (антибиотик можно применять только местно); растущие на всех трех концентрациях относят к устойчивым (антибиотик нельзя применять).

Схема определения чувствительности культуры к пенициллину.

Источник: http://studopedia.su/19_161754_opredelenie-chuvstvitelnosti-mikroorganizmov-k-antibiotikam.html

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) обычно применяют:

• Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков).Метод дисков — качественный и позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.

• Методы определения минимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественныеметоды, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.

Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри. Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам. Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10 6 -10 7 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  Антибиотики чувствительны к какому

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека.В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости. Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli. После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18-20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями. Концентрация антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий. Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024х0,313=320 мкг/мл составляет концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).

10. Устойчивость микроорганизмов к действию антибиотиков и пути её преодоления.

Устойчивость микроорганизмов к действию антибиотиков вызвана несколькими причинами. В основном они сводятся к следующим. Во-первых, в любой совокупности микроорганизмов, сосуществующих на каком-то определенном участке субстрата, встречаются естественно устойчивые к антибиотикам варианты (примерно одна особь на миллион). При воздействии антибиотика па популяцию основная масса клеток гибнет (если антибиотик обладает бактерицидным действием) или прекращает развитие (если антибиотик обладает бактериостатическим действием). В то же самое время устойчивые к антибиотику единичные клетки продолжают беспрепятственно размножаться. Устойчивость к антибиотику этими клетками передается по наследству, давая начало новой устойчивой к антибиотику популяции. В данном случае происходит селекция (отбор) устойчивых вариантов с помощью антибиотика. Вовторых, у чувствительных к антибиотику микроорганизмов может идти процесс адаптации (приспособления) к вредному воздействию антибиотического вещества. В этом случае может наблюдаться, с одной стороны, замена одних звеньев обмена веществ микроорганизма, естественный ход которых нарушается антибиотиком, другими звеньями, не подверженными действию препарата. При этом микроорганизм также не будет подавляться антибиотиком. С другой — микроорганизмы могут начать усиленно вырабатывать вещества, разрушающие молекулу антибиотика, тем самым нейтрализуя его действие. Например, ряд штаммов стафилококков и спороносных бактерий образует фермент пенициллиназу, разрушающий пенициллин с образованием продуктов, не обладающих антибиотической активностью. Это явление называется энзиматической инактивацией антибиотиков.

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:  При антибиотиках от дисбактериоза

Основные пути преодоления устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, снижающей эффективность лечения, следующие:

· изыскание и внедрение в практику новых антибиотиков, а также получение производных известных антибиотиков;

· применение для лечения не одного, а одновременно нескольких антибиотиков с различным механизмом действия; в этих случаях одновременно подавляются разные процессы обмена веществ микробной клетки, что ведет к быстрой ее гибели и в значительной степени затрудняет развитие устойчивости у микроорганизмов; применение комбинации антибиотиков с другими химиотерапевтическими препаратами. Например, сочетание стрептомицина с парааминосалициловой кислотой (ПАСК) и фтивазидом резко повышает эффективность лечения туберкулеза;

· подавление действия ферментов, разрушающих антибиотики (например, действие пенициллиназы можно подавить кристаллвиолетом);

· освобождение устойчивых бактерий от факторов множественной лекарственной устойчивости (R-факторов), для чего можно использовать некоторые красители.

Дата добавления: 2015-07-11 ; просмотров: 192 | Нарушение авторских прав

Источник: http://mybiblioteka.su/tom2/1-103798.html

Таблица чувствительности бактерий к антибиотикам

Таблица чувствительности бактерий к антибиотикам

Таблица поможет вам в работе. Стоимость — 128 рублей

купить презентацию

В папке на облаке mail.ru 2 изображения в формате jpeg, размер каждого – лист А4. Скачайте, распечатайте оба изображения и склейте. У вас получиться отличный плакат. Подойдет для информационного оформления отделения.

Определение чувствительности к антибиотикам – важный момент в антибиотикотерапии. Это не случайно, так как в настоящее время много резистентных (не чувствительных форм бактерий) к антибиотикам. Это огромная проблема современности. Не смотря на создание новых антибактериальных средств, бактерии успевают приспособиться к изменениям, создавая устойчивые формы (L-формы).

Определение чувствительности к антибиотикам – важный момент в антибиотикотерапии. Это не случайно, так как в настоящее время много резистентных (не чувствительных форм бактерий) к антибиотикам. Это огромная проблема современности. Не смотря на создание новых антибактериальных средств, бактерии успевают приспособиться к изменениям, создавая устойчивые формы (L-формы).

Исследователи различают две формы устойчивости микробов: первичную (природную) и вторичную (приобретенную).

Механизмы устойчивости к антибиотикотерапии:

  1. Непроницаемость клеточной стенки.
  2. Изменение строения или функции микробных структур, являющихся мишенью для антимикробных препаратов.
    1. Антибиотик должен достигнуть “больного” органа, для того, чтобы воздействовать на возбудителей инфекции.
    2. Антибиотик должен проникнуть в тот очаг, где происходит инфекционный процесс,
    3. Антибиотик должен создавать необходимые для уничтожения (или подавления) инфекционного агента концентрации.

Антибиотик должен быть способен

проникать через гисто-гематический барьер, отделяющий пораженную ткань от кровотока. Далее

идет такой важнейший элемент терапии, как доза препарата. Это очевидная вещь, чем больше

доза, тем вероятнее достижение лечебной концентрации.

Смотрите подробную таблицу чувствительности бактерий к антибиотикам для руководства и обоснования лечения. Это спектр активности антибактериальных препаратов по отношению к Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcus bovis, Streptococcuspneumoniae, Streptococcus viridans, Micobacterium tuberculosis, Micobacterium avium, Corynebacterium diphteriae, Moraxella catarrhlis, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria menintidis, Bordetella pertussis, Brucella spp, Campilobacter jejni, Francisella tularensis, Helicobacter pilori, Haemophilus ducreyi, Haemophilus influenzae, Citrobacter spp, Esherichia coli, Klepsiella pneumonia, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Salmonella spp, Salmonella typhi, Fctinomyces istraeli, Bacteroides fragilis, Fusobacterium spp., Clostridium difficile, Clostridium perfrigins, Clostridium tetani, Ureaplama urealyticum, Chlamydia psittaci, Pseudumons aeruginosa и др.

Приведен спектр следующих антибиотиков:

  • бензилпенициллин,
  • Феноксиметилпенициллин,
  • амоксициллин, ампициллин,
  • пиперациллин,
  • оксациллин,
  • амоксициллин / клавуланат,
  • ампициллин / сульбактам,
  • пиперациллин / тазобактам
  • тикарциллин / клавуланат
  • азтреонам
  • имипенем,
  • меропенем,
  • эртапенем,
  • цефазолин,
  • цефлексин,
  • цефаклор,
  • цефуроксим,
  • цефотаксим,
  • цефтриаксон,
  • цефтаидим,
  • цефоперазон,
  • цефаперазон / сульбактам,
  • цефиксим,
  • цефепим,
  • нилидиксовая кислота,
  • пипемидовая кислота,
  • норфлоксацин,
  • офлоксацин,
  • пефлоксацин,
  • ципрофлоксацин,
  • левофлоксацин,
  • моксифлоксацин,
  • гемифлоксацин,
  • ванкомицин,
  • линезолид,
  • метронидазол,
  • хлорамфеникол,
  • рифампицин,
  • Ко-тримоксазол,
  • фосфомицин,
  • фуразолидон,
  • нитроксолин,
  • сульфаниламиды,
  • эритромицин,
  • кларитромоцмн,
  • рокситромицин,
  • азитромицин,
  • мидекамицин,
  • спирамицин,
  • джозамицин,
  • клиндамицин,
  • линкомицин,
  • тетрациклин,
  • доксициллин,
  • канамицин,
  • гентамицин,
  • стрептомицин,
  • амикацин,
  • тобрамицин,
  • нетилмицин

Смотрите, что рассказывает про антибиотики доктор Комаровский:

Источник: http://zuboff.net/tablitsa-chuvstvitelnosti-bakteriy-k-antibiotikam/

Ссылка на основную публикацию